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3 种快速检测方法诊断盆腔结核价值分析

发布时间:2017-11-29
  摘要: 目的 探讨夹层杯法、Xpert MTB/RIF 系统和改良抗酸染色法在结核性盆腔积液中的诊断价值.方法 回顾性分析 51 例盆腔结核及 38 例盆腔恶性肿瘤病人的盆腔积液的夹层杯法、Xpert MTB/RIF 系统和改良抗酸染色法的检测结果,比较 3 种快速方法的检测灵敏度及特异度.结果 夹层杯法敏感性 3. 92% ( 2/51) ,特异性 97. 37%; XpertMTB / RIF 系统敏感性 25. 49% ( 13 /51 ) ,特异性 100. 00% ; 改良抗酸染色法敏感性 35. 29% ( 18 /51 ) , 特异性100. 00% .改良抗酸染色法与夹层杯法及 Xpert MTB / RIF 系统比较,其阳性率较高,与夹层杯法差异有统计学意义( χ2= 14. 06,P < 0. 01) ,但与 Xpert MTB / RIF 系统比较,差异无统计学意义( χ2= 3. 20,P > 0. 05) .Xpert MTB / RIF 系统和改良抗酸染色法联合诊断的阳性率为 41. 18%( 21/51) .结论 Xpert MTB/RIF 系统和改良抗酸染色法敏感性高、特异性好,两种方法联合应用效果更好,均适宜对盆腔结核进行辅助诊断.
 
  关键词: 盆腔结核; Xpert MTB/RIF; 改良抗酸染色法

  中国是结核病高发地区,近年来随着人口流动增强,艾滋病、糖尿病发病率增加以及耐药结核菌的出现,结核病流行趋势日益严峻,盆腔结核占肺外结核的11.19%[1],其病因是女性生殖器及腹膜感染结核菌从而引发炎症,发病时多合并输卵管结核[2].此病由于临床症状隐匿,病程迁延,实验室诊断方法的敏感性和特异性差,临床医师对该病认识不足等,确断和鉴别诊断困难,易发生漏诊,常被误诊为卵巢肿瘤及炎症包块,以致延误病情及错误治疗而导致不孕不育等不良后果[3],所以快速、准确、阳性率高的诊断技术非常重要.本研究对夹层杯法、XpertMTB/RIF系统和改良抗酸染色法3种快速检测方法的诊断结果进行分析,探讨它们的临床应用价值.
 
  1材料和方法
 
  1.1一般资料.临床病例资料来源于2011年1月~2016年12月,正定人民医院和河北省胸科医院妇产科收治的51例盆腔结核病人,年龄范围在(15~62)岁,<20岁者2例(3.92%),20~40岁组35例(68.63%),40~岁组14例(27.45%),平均年龄(29.2±10.6)岁;病程1月~8年,已婚42例、未婚9例;不孕症15例,其中原发性不孕症9例、继发性不孕症6例;既往有结核病史者7例,其中肺结核5例、肠结核1例、肾结核1例;与结核病人有密切接触史4例,有宫外孕史3例.另外38例妇科盆腔肿瘤病人年龄(21~65)岁,平均(30.5±12.8)岁,均为病理确诊病例.
 
  1.2临床表现.51例病人中有发热及月经不调32例,消瘦乏力、腹胀、腹痛44例,严重腹痛4例,闭经7例,体重下降5例,绝经后出血8例.主要体征为:盆腔有粘连,形状不规则,包块边界不清,质地有囊性、混合性和实性,以囊性为主,其中单侧囊性包块18例、双侧包块13例,活动度欠佳,伴盆腹腔积液量多少不等.
 
  1.3主要仪器和试剂.Cytospin4型玻片离心沉淀仪(shandon),低温离心机(eppendorf),显微镜(日本奥林巴斯).XpertMTB/RIF检测仪及试剂盒(美国Cepheid公司),抗酸染色液(珠海贝索生物技术有限公司),生物安全柜(美国NUAIRE).
 
  1.4方法
 
  1.4.1夹层杯法配套仪器和试剂由湖南天骑医学新技术有限公司提供.先将3~5ml盆腔积液加入夹层杯中,再加入适量消化液,在振荡器上剧烈振荡混匀,直至消化完全,放入烤箱内15min使结核菌灭活,然后放于离心涂片机中,4000r/min离心10min,弃掉上清液,按说明书进行抗酸染色,用取片针顶出夹层片,用中性树胶粘牢于载玻片上,油镜镜检.
 
  1.4.2XpertMTB/RIF法[4-5].取3~10ml盆腔积液加入一次性试管中,冷冻离心机放入,3500r/min离心15min,弃掉上清,加入2ml消化液,拧紧盖子剧烈摇动数次,再在振荡器上混匀,待标本中无可见块状物时常温放置15min,取2ml处理后标本放入反应盒中,然后将其放入XpertMTB/RIF平台中运行,仪器会自动进行样品过滤和洗涤,检测结束后在配备的电脑上直接观察测试结果.详细过程参照XpertMTB/RIF检测说明书.
 
  1.4.3改良抗酸染色法[6-8].取0.5ml经EDTA-K2抗凝的盆腔积液,混匀加入玻片离心沉淀机漏斗中,1000r/min离心5min,如果出现堵孔现象可往标本中加入适量4%氢氧化钠进行消化后再制片,直至离心后液体成分被滤纸吸收完全,取出离心支架,取出玻片自然干燥,滴加石炭酸复红染液,10min后自来水冲洗,然后3%盐酸酒精脱色0.5~1min,在水洗后美蓝复染0.5min,水洗,干燥后用油镜检查.
 
  1.5统计学分析.分别计算3种快速检测方法的敏感性、特异性,使用SPSS19.0统计学软件对数据进行分析,两种方法间的比较采用配对卡方检验,以P<0.05为差异有统计学意义.
 
  2结果
 
  2.1检测结果.51份盆腔积液分别用3种快速方法进行检测:夹层杯法阳性2例,敏感性3.92%;XpertMTB/RIF法阳性13例,敏感性25.49%;改良抗酸染色法检测阳性18例,敏感性35.29%;XpertMTB/RIF法和改良抗酸染色法检测联合诊断阳性21例,阳性率41.18%.
 
  作为阴性对照组的38例恶性肿瘤病人的积液用3种方法进行检测,只有夹层杯法检出1例,其特异性97.37%,其余两种方法特异性100.00%.
 
  2.2 3种检测方法比较.XpertMTB/RIF法与夹层杯法比较,XpertMTB/RIF法的敏感性较高,差异有统计学意义(χ2=9.09,P<0.05);XpertMTB/RIF法和改良抗酸染色法比较,改良抗酸染色法敏感性较高,但差异无统计学意义(χ2=3.20,P>0.05);改良抗酸染色法和夹层杯法比较,改良抗酸染色法敏感性高,差异有统计学意义(χ2=14.06,P<0.01).XpertMTB/RIF法联合改良抗酸染色法阳性率高于所有单一方法.
 
  3讨论
 
  结核病严重威胁人类健康,全世界每年约200万人死于该病,我国的防控形势不容乐观,耐药结核菌的比例日益上升,女性盆腔结核病人随之增多,由于其临床表现特异性差、变化多样,影像学特点与肿物容易混淆,与卵巢肿瘤、炎性包块、卵巢癌等鉴别困难.临床医师对盆腔结核性包块认识不足,考虑此病较少,误诊常见[9-10],致使大部分病人进行不必要的检查和错误治疗,据报道其误诊率在80.0%左右[11].盆腔结核的实验室诊断方法敏感性和特异性不高[12],一般的离心涂片抗酸染色虽然经济快速,但是敏感性太低,对临床指导意义不大,培养所需时间长,不能做到及时确诊,而结核抗体、T-SPOT、血沉、结核菌素试验等特异性差,病人常由于不能及时诊疗造成终身不孕不育.准确、快速的检测方法一直是盆腔结核病诊断的瓶颈.
 
  夹层杯法的原理是将标本加入特制的塑料杯中,加入消化液使标本中的蛋白破坏从而使包裹的结核菌分散开来,通过离心使菌沉淀下来,然后取杯里的薄膜进行检测,此方法使得痰标本的阳性率较直接涂片法有所提高[13],但是对盆腔积液的检测未见详细报道.本研究夹层杯法的敏感性只有3.92%,而改良抗酸染色[6-8]法达到35.29%,与有关报道[6]的43.75%略低,虽两者均为离心浓集的原理,但是其敏感性有差异的原因可能是:①夹层杯法离心的过程中液体成分一直存在,受到浮力的影响,部分结核菌不能通过高速离心沉淀下来,弃上清时造成损失;而改良抗酸法离心过程中液体被滤纸吸收,无浮力存在.②夹层杯法杯底的面积较大,阅片时不能照顾到大部分面积,会漏掉部分有菌的视野;而改良抗酸染色法沉淀面积直径只有0.6mm,阅片时可以照顾到所有面积.③盆腔积液多为刺激产生,里面即使有菌浓度也不高,方法学的微小差异就可能造成结果的明显不同.
 
  XpertMTB/RIF系统是美国Cepheid开发的实时荧光定量PCR技术,检测病人是否感染了结核分枝杆菌[14],可在2h左右给出结果,是一个自动化的平台,可以区分结核和非结核分枝杆菌.Boehme等[15]对7288例疑似结核病人的痰标本进行XpertMTB/RIF检测,培养阳性的标本其一次检出率为90.3%,涂片阴性而培养阳性的标本检出率为76.9%.XpertMTB/RIF在肺结核诊断方面得到了医学界的认可,但是其在盆腔结核的诊断方面报道不多.邹月丽等[16]
 
  报道,脑脊液改良抗酸染色法的阳性率(63.33%)较XpertMTB/RIF阳性率明显增高(18.33%),本研究XpertMTB/RIF的敏感性(25.49%)亦较改良抗酸染色法的敏感性(35.29%)低,其可能原因包括:①虽然XpertMTB/RIF是基因扩增的方法,但是也需要菌达到一定的浓度,消化处理会稀释结核菌,标本在离心的过程中部分未被沉淀下来的菌会丢失;而改良抗酸染色对菌的浓度要求更低,所以阳性率高.②结核菌的基因检测是基于对结核菌完整核酸提取的基础上进行的,而抗酸染液是与结核菌细胞壁结合,非完整的菌体也可得到阳性结果.51个标本中有1个标本首次结果无效,第2次得到阳性结果,可能是标本消化不彻底造成的.
 
  综上所述,3种快速法中改良抗酸染色法敏感性最高,但是不能区分结核菌与非结核分枝杆菌,XpertMTB/RIF敏感性虽然不及改良抗酸染色法,但是除了可以区分结核和非结核菌还可以得到利福平药敏结果,两者均有快速、简便、特异性高等优点,将两种方法联合应用可在盆腔结核的诊断方面发挥更大优势,值得临床应用.
 
  参考文献
 
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